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Aber es gibt doch noch das Alte Testament! Sie sind noch mehr: Sie waren für Luther noch viel unverständlicher als bei heutigem Kenntnis - und Forschungstand, der sich seit der "Wieder-Entdeckung" des Hebräischem im Jahrhundert bis heute eingestellt hat. Nicht einmal Stalin, Mao oder Hitler haben Vergleichbares geschafft! Das "ergo sum" des Rene Descartes 2.

Na kalr, die 2. Diesen Hinweis haben wir aufgeschnappt von einem Professor in einem philosophischen Seminar der Universität Düsseldorf, der überdies so kühn war, die unten genannte Quelle Tugenhat zur neueren Sicht des Widerspruchs vorzustellen … 2. Voraussetzung als implizit oder stillschweigend auffassen kann, um sie zu rekonstruieren.

Das wäre zunächst reinste Geschmackssache. Eines aber ist klar: Ist er Vollverb, gelangt man zur metaphysischen Teildisziplin der Ontologie, also der "Lehre vom Sein", ist er Hilfsverb gelangt man in Nebenwege der Grammatik, die hier wahrscheinlich keine Rolle spielen. Jahrhunderts, ergibt - und zwar mit allen bedenklichen Übertreibungen, und zwar bis hin zum Wahnsinn Nietzsches! Der Kernpunkt scheint uns der zu sein: Descartes ist vielleicht Gott nicht völlig abhanden gekommen, aber er benötigt ihn nicht mehr.

Wir verdeutlichen dies an Hand eines Gedankens des zeitgenössischen Hugo Grotius Grotius benötigt keinen Gott mehr für deduktive Ableitungen, denn er sagt ungefähr: Jahrhunderts und insbesondere nach den Gödel-Theoremen von Die Religion sagt nach alter Weise klipp und klar: In Asien würde man fast überall unmittelbar einwenden: Jahrhundert verbreiteten unverständigen europäischen Fehlinterpretationen vielleicht sogar propagandistischer Art zum Trotz.

Womit wir sagen wollen: Jahrtausends werden könnten, jedenfalls so weit wir im Augenblick zu sehen vermögen. Brunton spielt in der akademischen Berufsphilosophie keine nennenswerte Rolle und wir fügen deshalb hier einige und wenige Literaturhinweise direkt ein: Hermann Bauer und öfter ; engl.

Aquamarin c Brunton, Paul: Hermann Bauer , 6. The Quest of the Overself 2. Jede vielleicht propädeutisch wünschenswerte Akzentuierung von "Ich" und "Ich-Existenz" hebt sich selbst irgendwann auf, weil es nicht darum geht, sondern um eine - ostchristlich orthodox gesagt: Zur zentralen Stellung des Widerspruchs bei Karl Marx 3. Das glaubt uns bestimmt keiner - und wir geben vorsichtshalber eine Quelle an: Reclam paperback , S.

Man stelle sich vor: Das, woran im Jahrhundert gar etliche scheiterten, ist heute Gegenstand der Propädeutik, also der Vorbereitung - und erst danach kommen dann die hauptsächlichen Stücke heutiger Forschung. Dieserhalb erinnern wir uns, wie im Lateinischen der "volksverderbende Aufrührer" benannt wurde, nämlich als ein Mann "cupidus rerum novarum", also als jemand, der nach Neuem lüstert oder giert.

Und warum tut der Aufrührer so im Unterschied zum echten Reformer? Wie vernebelt man erfolgreich das Denken? Nein, so haben wir das ja noch nie gesehen. Das geht dann solange gut, bis ein Kind wie im Märchen daherkommt und ausruft: Our Lady of Wladimir Sergieij Posad.

Krolowo Polski Czenstochava - Jasna Gora. Doch Anfang Januar bereits beschlossen, dass die neuen Pflegeeltern sagt. However, in early January already decided that the new foster parent says.

V-Bird wurde Anfang Januar liquidiert. V-Bird was liquidated in early January At the beginning of January , the re-engineered Innocrush 30 was handed over to Michetschläger, a company based in Eberstalzell Fig. The infringement commenced at the beginning of January and continued until the end of September The Commission intends to adopt a corresponding Communication to the Council and Parliament at the beginning of January The second term then starts at the beginning of January and finishes at the end of March.

In early January , following a Christmas vespers service in the southern Egyptian town of Nag Hammadi, six Copts were massacred. Tief Anfang Januar zu überprüfen, alles aus! Deeply in early January to check everything out! However, in early January the Council informed us that it wished to withdraw its request for assent to enable the Commission's proposal to be revised and presented again.

Trotz des Anfang Januar vereinbarten Waffenstillstands wurden unlängst weite Teile des nördlichen Darfur von der sudanesischen Luftwaffe bewusst bombardiert. Nor is it known if the peptide containing this Fettsaüre-modified amino acid functions as a ligand for any receptor.

Offenbarung der Erfindung Disclosure of the Invention. Before the present invention is described in detail, the terms are defined as follows: The term "peptide" refers to a compound comprising a plurality of amino acids that are connected therein via peptide linkages herein comprises the amino acid naturally also referred to as amino acid residue occurring amino acids represented by the formula: Es gibt auch ein Peptid, in dem eine bestimmte natürlich vorkommende Aminosäure durch eine modifizierte Aminosäure ersetzt ist auch als modifizierter Aminosäurerest bezeichnet.

There is also a peptide, wherein a certain naturally occurring amino acid is replaced by a modified amino acid also called a modified amino acid residue designated. The modified amino acid includes the amino acids of the above formula wherein the substituent R 'is further modified, its optical D, L-isomers and non-natural amino acids, where z. The modified amino acid also includes non-natural amino acids whose amino groups are replaced by lower alkyl groups.

The term "peptide analog" refers to a compound in which at least one amino acid in a peptide is replaced by a non-amino acid compound, and thus at least one linkage of the peptide analog to Substituentenverbindung no peptide linkage is.

And the peptides, peptide analogs and derivatives thereof are collectively referred to as "peptide-type compound". The discovery of an endogenous ligand endogenous GHS which binds to the GHS receptor, so as to exhibit an activity for increasing the intracellular calcium ion concentration or for inducing GH secretion was composed desired with a method for its use.

Further, a compound has been desired, which is a structural analogue of the endogenous GHS and has an activity for increasing the intracellular calcium ion concentration or for inducing GH secretion.

Furthermore was a pharmaceutical composition or a composition for promoting the growth of living beings, which comprises said endogenous GHS or its structural analog, which induce the pulsating GH secretion, thereby reducing the side effects of GH administration to be eliminated, as well as a therapeutic application using said composition he wishes.

The present inventors focused their attention on the fact that the binding of the ligand produces at the GHS-receptor GHS-R , a temporary increase in the intracellular calcium ion concentration with inositol phospholipid as second messenger, and they screened extracts of various organs and tissues by using the activity for increasing the intracellular calcium ion concentration Ca-releasing activity as an indicator in CHO cells CHO-GHSR62 expressing GHS-R. As a result, the inventors found that stomach extracts of rat have a strong Ca-releasing activity, and purified a substance having a strong Ca-releasing activity from the above extracts by various types of chromatography successful and found that the substance is a new is peptide which is modified with fatty acid having a molecular weight of about 3, Further, they confirmed that the novel peptide accelerated the specific secretion of GH from cells of Hypophysenvorderlappenextrakts, and found that the novel peptide is an endogenous ligand for GHS-R, that is, an endogenous GH Secretagogu endogenous GHS.

That is, the first aspect of the present invention is directed to an endogenous GH secretion-inducing peptide having the activity of increasing the intracellular calcium ion concentration or the activity of inducing GH secretion, wherein a certain constituent amino acid residue is modified with fatty acid, and a method directed for the production of the peptide.

The present inventors analyzed exactly the structure of the endogenous GH secretion-inducing peptide, and found that said peptide is a peptide consisting of the amino acid sequence indicated in SEQ ID No.: Further, a human-derived GH secretion-inducing peptide, as well from human stomach extract having a strong Ca-releasing activity was purified similar to that of rat stomach extract and analyzed as for the derivative of rat GH secretion-inducing peptide in terms of its structure in the same manner, and the inventors therefore have found that the human-derived endogenous GH secretion-inducing peptide consists of the amino acid sequence indicated in SEQ ID No.: Speziell ist das von der Ratte und das vom Menschen abgeleitete Peptid in einer Aminosäuresequenz der 1.

Aminosäure am Aminoende und in einer Aminosäuresequenz der Aminosäure am Aminoende identisch, unterscheidet sich aber in der Aminosäure, die Lysin und Alanin in dem Rattenpeptid sind, die durch Arginin beziehungsweise Valin in dem menschlichen Peptid ersetzt sind. Specifically, identical to that of the rat and human-derived peptide in the amino acid sequence of the 1st to 10th amino acid at the amino terminus and one amino acid sequence of the 13th to the 28th amino acid at the amino terminus, but differs in the 11th to 12th amino acid , lysine and alanine in the rat peptide are, which are replaced by arginine or valine in the human peptide.

Das von Ratten abgeleitete endogene GH-Sekretion-induzierende Peptid wurde mit verschiedenen Proteasen gespalten, und seine gereinigten Peptidfragmente wurden hinsichtlich der Ca-freisetzenden Aktivität gemessen, und infolgedessen war ein Peptid, bestehend aus der 1.

Aminosäure am Aminoende, das minimale Peptid mit der Ca-freisetzenden Aktivität. The derived from rat endogenous GH secretion-inducing peptide was cleaved with various proteases and its purified peptide fragments were measured for Ca-releasing activity, and as a result was a peptide consisting of the 1st to 7th amino acid at the amino terminus, the minimum peptide having the Ca-releasing activity.

By measuring the Ca-releasing activity of chemically synthesized peptides, the inventors found that the core sequence, which is essential for triggering the Ca-releasing activity is a sequence of 4 amino acids set forth in SEQ ID No.: That is, the second aspect of the present invention is directed to a fatty acid-modified peptide comprising the amino acid sequence is given in SEQ ID NO.: Endogenous GH secretion-inducing peptides were also isolated from chicken, eel and frog, and it was found that these peptides have a core sequence consisting of 4 amino acids indicated in SEQ ID No.: It was also an endogenous GH secretion-inducing peptide very similar to the rat endogenous GH secretion-inducing peptide isolated from the frog.

Further, endogenous GH secretion-inducing peptides also from Xenopus laevis were rainbow trout Oncorhynchus mykiss , and dog isolated. Aus der Regenbogenforelle wurden Ghrelin, das aus 23 Aminosäuren besteht, beziehungsweise Ghrelin, das aus 20 Aminosäuren besteht, isoliert. From the rainbow trout were ghrelin consisting of 23 amino acids, or ghrelin consisting of 20 amino acids, isolated.

The carboxyl-terminal amino acid of eel ghrelin, rainbow trout ghrelin and -Ghrelin was amidated. Because an amino acid residue at the third position from the amino terminus is in the endogenous GH secretion-inducing peptide from Xenopus laevis threonine, the present invention also relates to a fatty acid-modified peptide as the core sequence showing the Ca-releasing activity is essential, containing a peptide, in which the third amino acid residue serine by threonine in the amino acid sequence indicated in SEQ ID NO.: Das endogene Fettsäure-modifizierte Peptid mit GH-Sekretion-induzierender Aktivität oder das Fettsäuremodifizierte Peptid, das aus der Kernsequenz besteht, die in der vorliegenden Erfindung offenbart wird, stellt ebenso eine Richtlinie zur Gestaltung einer Verbindung mit Ca-freisetzender Aktivität bereit.

The endogenous fatty acid-modified peptide having GH secretion-inducing activity or the fatty acid-modified peptide consisting of said core sequence, disclosed in the present invention as well provides a guideline for designing a compound having Ca-releasing activity.

That is, a novel compound having Ca-releasing activity by synthesizing a structural analogue of said fatty acid-modified peptide is obtained by confirming the Ca-releasing activity of the resulting structural analogue in the third aspect of the present invention.

Accordingly, the present invention also encompasses a peptide or peptide analog, as defined in the claims having the activity of increasing the intracellular calcium ion concentration, wherein a certain constituent amino acid is replaced by a modified amino acid or non-amino acid compound.

Position am Aminoende identisch. That is, it was revealed that the endogenous GH secretion-inducing peptide as a Präkursorpeptid consisting is of amino acids, synthesized, then a signal peptide consisting of 23 amino-terminal amino acids is cleaved off and further 56 carboxyl-terminal amino acids are cleaved off, whereby the fatty acid-modified peptide having GH secretion-inducing activity is formed.

In addition, a cDNA consisting of 28 amino acids, encodes a precursor of the endogenous GH secretion-inducing peptide, also found in the pig. Further, a cDNA coding a precursor for the endogenous GH secretion-inducing peptide consisting of 27 amino acids found in swine.

Further, a partial cDNA coding a precursor for the endogenous GH secretion-inducing peptide consisting of 27 amino acids, found in bovine. Further, a cDNA coding a precursor of the endogenous GH secretion-inducing peptide, and in eel, Xenopus laevis and found in the rainbow trout.

From rainbow trout, a cDNA coding a precursor of ghrelin consisting of 23 amino acids that were, or a cDNA encoding a precursor of ghrelin of 20 amino acids, isolated. Consequently, the fourth aspect of the present invention resides in a process for producing a peptide as a starting material of the fatty acid-modified peptide or peptide analogue with Ca-releasing activity, which comprises using a cDNA coding a precursor of the endogenous GH secretion-inducing peptide, includes.

Bei der Reinigung des endogenen GH-Sekretion-induzierenden Peptids Ghrelin , bestehend aus 28 Aminosäuren, aus Rattenmagenextrakt, wurde ein Peptid, das als eine kleinere Fraktion gewonnen wurde, analysiert, und infolgedessen wurde ein Peptid, bestehend aus 27 Aminosäuren Ghrelin , das ein Peptid von Ghrelin ist, von dem das Glutamin deletiert wurde, gefunden. In the purification of the endogenous GH secretion-inducing peptide ghrelin composed of 28 amino acids from rat stomach extract, a peptide that has been recovered as a minor fraction analyzed, and as a result, a peptide consisting of 27 amino acids ghrelin 27 , which is a peptide of ghrelin from which the 13th or 14th glutamine was deleted found.

Ghrelin weist vollkommen dieselbe Ca-freisetzende Aktivität und GH-Sekretion-induzierende Aktivität wie die von Ghrelin, bestehend aus 28 Aminosäuren, auf, und Ghrelin ist ein endogenes GH-Sekretion-induzierendes Peptid, und daher fällt Ghrelin ebenso in den Umfang der vorliegenden Erfindung. Ghrelin has completely the same Ca-releasing activity and GH secretion-inducing activity as those of ghrelin consisting of 28 amino acids, and ghrelin is an endogenous GH secretion-inducing peptide, and thus ghrelin also falls in the scope of the present invention.

Die Nukleotidesequenz, die das The Nukleotidesequenz encoding the 13th and 14th glutamine in ghrelin is gca gca, which is a terminal exon sequence that should be subject to the mRNA splicing, raising the possibility of forming a cDNA from which one of two codons for glutamine residues by different splicing has been deleted, suggesting. In fact, a cDNA encoding a Präkursorpeptid of ghrelin consisting of 27 amino acids found in screening of rat and human cDNA libraries.

That is, it was revealed that rat and human ghrelin peptide is synthesized as a Präkursorpeptid consisting of amino acids indicated in SEQ ID No.: Further, a cDNA coding a precursor of ghrelin peptide found in porcine and bovine, and the presence of ghrelin and its precursor was confirmed in these animals. That is, the present invention also encompasses ghrelin peptide as defined in the claims consisting of an amino acid sequence set forth in SEQ ID No.: Das Fettsaüre-modifizierte Peptid mit Ca-freisetzender Aktivität und die peptidartige Verbindung, wie ein Peptidanalogon, mit Ca-freisetzender Aktivität, wie in der vorliegenden Erfindung offenbart, stellen ebenso eine pharmazeutische Zusammensetzung zum Behandeln von Krankheiten, die einem Defekt oder einem Mangel von GH zuzuschreiben sind, bereit.

The Fettsaüre-modified peptide having Ca-releasing activity and the peptide-type compound such as peptide analogue having Ca-releasing activity as disclosed in the present invention, as well as provide a pharmaceutical composition for treating diseases which a defect or deficiency of GH attributable are ready. Die pharmazeutische Zusammensetzung kann verwendet werden, um jede Krankheit zu behandeln, gegen die die GH-Verabreichung wirksam ist, und verschiedene Nebenwirkungen, die durch die GH-Verabreichung hervorgerufen werden, können überwunden werden.

The pharmaceutical composition can be used to treat any disease against which the GH administration is effective, and various side effects caused by GH administration can be overcome.

Ferner kann die pharmazeutische Zusammensetzung ebenso als Arzneimittel für Lebewesen, wie ein wachstumsförderndes Mittel für Tiere, verwendet werden.

Further, the pharmaceutical composition may also as a drug for animal, such as a growth-promoting agent for animals are used. Da die peptidartige Verbindung der vorliegenden Erfindung eine Appetit fördernde Wirkung bei Verabreichung in den Ventrikel und bei intravenöser Verabreichung aufweist, kann sie daher als ein Appetit förderndes Mittel zum Behandeln von Appetitverlust oder Sitophobie verwendet werden.

Because the peptide-type compound of the present invention has an appetite-promoting action upon administration into ventricle and intravenous administration, it can therefore be used as an appetite promoting agent for treating loss of appetite or Sitophobie.

In addition, the present peptide-type compound has a gastric motility and gastric acid secretion-promoting effect, so that it can be used as an agent for treating stomach functional diseases such as non-ulcer indigestion, sudden slight gastric atony, Funktionsindigestion and reflux esophagitis. Further, the present peptide-type compound in intravenous administration shows a cell growth-promoting action in bone marrow, duodenum and jejunum, so that it contains as an agent for protecting the mucosa of the intestinal tract, an agent for prevention of damage to the mucosa in the small intestine during intravenous nutrition and an agent for treatment of osteoporosis can be used.

The present invention also comprises an antibody as defined in the claims, prepared by using the fatty acid-modified peptide having Ca-releasing activity disclosed in the present invention as an antigen, a method for measuring the endogenous GH secretion-inducing peptide using said antibody and a measuring kit, comprising the antibody.

Further, the present invention encompasses an assay method for separating and quantifying ghrelin modified with a fatty acid and ghrelin from which the fatty acid has been removed, comprising the use of two antibodies, raised against N- and carboxyl-terminal peptides from ghrelin, the former antibody can detect fatty acid-modified third serine, as well as an assay kit comprising a combination of the antibody against N- and carboxyl-terminal peptides from ghrelin.

That is, the present invention provides a novel peptide hormone having a novel modified amino acid, that is acylated serine, ready, and also provides a guideline for the new design of a compound having Ca-releasing activity with the structure of the peptide as a fundamental skeleton ready.

Further, it is assumed that the elucidation of the mechanism of induction of GH secretion by the fatty acid-modified peptide disclosed in the present invention or by GH releasing factor and somatostatin not only to the mechanism of induction of GH secretion but also extends to the mechanism regulating the secretion of other hormones. Die vorliegende Erfindung offenbart verschiedene Funktionen des Fettsäure-modifizierten Peptids als einen Regulationsfaktor in dem Kreislaufsystem und dem Stoffwechselsystem, und die Wirkung der vorliegenden Erfindung erstreckt sich auf die Aufklärung eines neuen biologischen Regulationsmechanismus.

The present invention discloses various functions of the fatty acid-modified peptide as a regulatory factor in the circulatory system and the metabolic system, and the effect of the present invention extends to the elucidation of a new biological regulatory mechanism.

Speziell bezieht sich die vorliegende Erfindung auf: Specifically, the present invention relates to: In der vorliegenden Erfindung bezieht sich die modifizierte Aminosäure auf eine Aminosäure, bei der eine beliebige Gruppe davon chemisch modifiziert ist. In the present invention, the modified amino acid refers to an amino acid wherein an arbitrary group thereof is chemically modified.

Eine Aminosäure, bei der ein in der natürlichen Aminosäure vorliegender Substituent als durch R' und R'' dargestellter Substituent durch einen Substituenten, der nicht in der natürlichen Aminosäure oder in ihrer entsprechenden D-Aminosäure vorliegt, ersetzt ist, wird als die modifizierte Aminosäure bezeichnet. An amino acid, in which a 'shown in the natural amino acid present substituent as represented by R' and R 'substituent is replaced by a substituent which is not present in the natural amino acid or in its corresponding D-amino acid is referred to as the modified amino acid ,.

Wenn die natürlich vorkommende Aminosäure z. When the naturally occurring amino acid such. B is -OH, -SH, -NH or -NH2 as a substituent in a side chain thereof, a group formed by acylating such a substituent, mentioned as a preferred example of the above-mentioned substituents.

The acyl group thus includes, for. Gruppen, die durch Entfernen einer Hydroxylgruppe aus einer organischen Carbonsäure, organischen Sulfonsäure und organischen Phosphorsäure gebildet wurde. The organic carboxylic acid includes, for. Fettsäuren, und die Anzahl an Kohlenstoffatomen davon beträgt bevorzugt 2 bis 35, stärker bevorzugt 6 bis 18 und am stärksten bevorzugt 8 bis Diese Fettsäuren umfassen z.

As fatty acids, and the number of carbon atoms thereof is preferably 2 to 35, more preferably 6 to 18 and most preferably 8 to These fatty acids include, for. Octansäure bevorzugt Caprylsäure , Decansäure bevorzugt Caprinsäure und Dodecansäure bevorzugt Laurinsäure , sowie Monoen- oder Polyenfettsäuren davon. In der organischen Sulfonsäure oder organischen Phosphorsäure beträgt die Anzahl an Kohlenstoffatomen bevorzugt 2 bis In the organic sulfonic acid or organic phosphoric acid, the number of carbon atoms preferably from 2 to 35th.

Ferner kann P -CO- sein. Further, P may be -CO-. In jedem oben beschriebenen -NH- kann H durch eine gesättigte oder ungesättigte C -Alkylgruppe, eine C -Arylgruppe oder eine C -Aralkylgruppe ersetzt sein. In every -NH- described above, H may be by a saturated or unsaturated C alkyl group, a C aryl group be substituted or a C aralkyl group. Die Bindungsweise, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Ester, Ether, Thioester, Thioether, Amid und Carbamid, über oder nicht über eine Alkylgruppe, enthaltend ein oder mehrere Kohlenstoffatome, wird ausführlicher beschrieben.

The bonding mode selected from the group consisting of ester, ether, thioester, thioether, amide and carbamide via or not via an alkyl group containing one or more carbon atoms is described in more detail. For example, when the amino acid serine, threonine, tyrosine or oxyproline, the amino acid has a hydroxyl group in the side chain. When the amino acid is cysteine, the amino acid has a mercapto group in the side chain. When the amino acid is lysine, arginine, histidine, tryptophan, proline or oxyproline, it has an amino group or imino group in the side chain.

Die oben beschriebene Hydroxylgruppe, Mercaptogruppe, Aminogruppe und Iminogruppe können chemisch modifiziert sein. The above-described hydroxyl group, mercapto group, amino group and imino group may be chemically modified. That is, the hydroxyl group or mercapto group can be etherified, esterified, or thioesterified thioverethert.

Die Iminogruppe kann iminoverethert, iminothioverethert oder alkyliert sein. The imino group can iminoverethert, iminothioverethert or alkylated. Die Aminogruppe kann amidiert, thioamidiert oder carbamidiert sein. The amino group may be amidated, thioamidiert or carbamidiert.

Ferner kann die Mercaptogruppe disulfidiert sein, die Iminogruppe kann amidiert oder thioamidiert sein, und die Aminogruppe kann alkyliert oder thiocarbamidiert sein. Further, the mercapto group may be disulfidiert, the imino group may be amidated or thioamidiert, and the amino group may be alkylated or thiocarbamidiert.

Die so chemisch modifizierte Hydroxylgruppe oder Mercaptogruppe kann beispielsweise durch: The thus chemically modified hydroxyl group or mercapto group can, for example, by: Die amidierte oder thioamidierte Aminogruppe oder Iminogruppe kann durch: The amidated or thioamidierte amino group or imino group can be obtained by: Die veretherte Hydroxylgruppe oder Mercaptogruppe kann durch: The etherified hydroxyl group or mercapto group can be obtained by: Die iminoveretherte oder iminothioveretherte Iminogruppe kann durch: The iminoveretherte or iminothioveretherte imino group can be obtained by: Die alkylierte Aminogruppe kann durch: The alkylated amino group can be obtained by: Die alkylierte Iminogruppe kann durch: The alkylated imino group can be obtained by: Die carbamidierte oder thiocarbamidierte Iminogruppe kann durch: The carbamidierte or thiocarbamidierte imino group can be obtained by: Die disulfidierte Mercaptogruppe kann durch: The disulfidierte mercapto, by: In the above formulas, Z 1, Z 2, Z 3, Z 4, Z 5, Z 6, Z 7 and Z 8 may be any substituent for chemical modification insofar as they are not directed against the sense of the present invention, but since substituents that are conventionally used in a pharmaceutical field or for chemical modification of peptides are well known in the patent literature, or scientific literature, these known substituent can be used to modify, and according to these known methods, the chemical modification can be performed in the present invention ,.

In den obigen Formeln kann Z 1 ein Wasserstoffatom oder eine lineare, verzweigte oder cyclische Alkylgruppe sein, und diese Alkylgruppe kann gesättigt oder ungesättigt sein. In the above formulas, Z 1 may be a hydrogen atom or a linear, branched or cyclic alkyl group, and this alkyl group may be saturated or unsaturated. Die Anzahl an Kohlenstoffatomen davon beträgt normalerweise C , bevorzugt C The number of carbon atoms thereof is usually C , preferably C Z 2 , Z 3 , Z 4 , Z 5 , Z 6 , Z 7 oder Z 8 kann ein Wasserstoffatom oder eine geradkettige, verzweigte oder cyclische Alkylgruppe sein, und diese Alkylgruppe kann gesättigt oder ungesättigt sein.

Z 2, Z 3, Z 4, Z 5, Z 6, Z 7 or Z 8 may be a hydrogen atom or a linear, branched or cyclic alkyl group, and this alkyl group may be saturated or unsaturated. The alkyl groups represented by Z 1, Z 2, Z 3, Z 4, Z 5, Z 6, Z 7 or Z 8 may be substituted with substituents such as a hydroxyl group, an amino group, a halogen, a nitro group and a C -alkoxy group, which are used conventionally for chemical modification of peptides.

The fatty acid in this case includes, for. Die ungesättigte Fettsäure kann ein Monoen oder Polyen sein. As a saturated fatty acid such as caprylic acid, capric acid, lauric acid, butyric acid, hexanoic acid, undecylic acid, palmitic acid, decanoic acid, nonadecanoic acid, behenic acid, montanic acid and Dotriacontansäure, and an unsaturated fatty acid such as acrylic acid, oleic acid, linoleic acid, linolenic acid and stearolic acid "aatearolic acid".

The unsaturated fatty acid may be a monoene or polyene. In der vorliegenden Erfindung kann die modifizierte Aminosäure ebenso eine Aminosäure sein, die durch Einführen einer gesättigten oder ungesättigten C -Alkylgruppe in die Aminogruppe der Aminosäure gebildet wird. In the present invention, the modified amino acid may also be an amino acid that is formed in alkyl group, the amino group of the amino acid by introducing a saturated or unsaturated C.

The non-natural amino acid in the present invention is one that has an amino group and a carboxyl group in both terminals of the molecule, and includes, for. The length of their molecular chain corresponds to the length of a dipeptide, but the non-natural amino acid in the present invention also includes those having the length of a peptide.

Further, the non-amino acid compound comprises in the present invention, z. Jedes Symbol gibt einen Durchschnittswert von 4 Ratten an, und der Standardfehler ist durch einen Fehlerbalken gezeigt.

Each symbol indicates an average value from 4 rats, and the standard error is shown by an error bar. Als Kontrolle wurde physiologische Kochsalzlösung verabreicht.

As a control, physiological saline solution was administered. An dem mit Pfeil gekennzeichneten Punkt wurde das Arzneimittel verabreicht. At the arrowed point, the drug was administered.

B ist eine graphische Darstellung, die einen Durchschnittswert von 4 Ratten zusammen mit dem Standardfehler zeigt. B is a graph showing an average value from 4 rats along with the standard error. An dem mit Pfeil gekennzeichnet Punkt wurde das Arzneimittel verabreicht. At the point marked with arrow the drug was administered. Die Symbole in den graphischen Darstellungen sind wie folgt: Ratten-Ghrelin O ; Symbols in the graphs are as follows: Rat ghrelin O ; Menschen-Ghrelin Human ghrelin.

When a peptide is used GHS-R as an endogenous ligand for GHS receptor, the distribution of the endogenous ligand in organs or tissues by adding an extract from various organs or tissues to cells expressing FHS-R, and measuring the intracellular calcium ion concentration must be known.

The cells expressing GHS-R include the hypothalamus and pituitary gland-derived strains, which are known to express GHS-R constantly and their tissues, but the cells are preferably those transformed cells expressing the GHS-R gene which comprise in suitable cells such as CHO cells is introduced and expressing the gene.

Die starke Ca-freisetzende Aktivität des endogenen GHS-Peptids der vorliegenden Erfindung wurde nicht im Hypothalamus und der Hypophyse, die das Peptid exprimieren, sondern in einem Extrakt aus dem Magen als ein Organ im Verdauungsorgansystem gefunden. The strong Ca-releasing activity of the endogenous GHS peptide of the present invention was found not in the hypothalamus and pituitary gland expressing the peptide, but in an extract from stomach as an organ in the digestive organ system.

Es ist daher notwendig, nicht nur Gewebe und Organe, die den Rezeptor exprimieren, sondern auch eine breite Vielzahl anderer Gewebe und Organe zu untersuchen, um den gewünschten endogenen Liganden für den Orphanrezeptor zu finden. It is therefore necessary not only tissues and organs that express the receptor, but also a wide variety of other tissues and organs to investigate to find the desired endogenous ligand for the orphan.

To obtain the desired endogenous GHS peptide from tissues and organs, has been confirmed by the in that it shows the Ca-releasing activity, any purification method known in the art may be used. Gelfiltrations-, Ionenaustausch- und Umkehrphasen-Chromatographietechniken werden einzeln oder in Kombination nach einer breiten Vielzahl von Fraktionierungsverfahren effektiv als Verfahren zum Reinigen des Peptids verwendet, oder diese werden separat verwendet, aber es ist möglich, nicht nur diese Chromatographietechniken, sondern auch jegliche Mittel zu verwenden, die zur Reinigung des Peptids wirksam sind.

Gel filtration, ion exchange and reverse phase chromatography can be used effectively alone or in combination according to a wide variety of fractionation methods as a method for purifying the peptide, or they are used separately, but it is possible not only these chromatographic techniques but also any means to use that are effective for cleaning of the peptide. Zur Isolation und Reinigung des Peptids aus Geweben und Organen ist die Inaktivierung von Proteasen in den Geweben und Organen durch deren Wärmebehandlung in kochendem Wasser gewünscht, um den Abbau des gewünschten Peptids durch die Wirkung der Proteasen zu verhindern.

For isolation and purification of the peptide from tissues and organs, inactivation of proteases in the tissues and organs is desired by the heat treatment thereof in boiling water to prevent degradation of the desired peptide by the action of proteases. Heat treatment and removal of the tissues and organs under cooling on ice are also effective for extraction and purification of the desired peptide.

To confirm that the purified peptide having the Ca-releasing activity has a GH secretion-inducing activity in vitro and in vivo, a known method can be used. For example, GH expressing in a medium a Hypophysenzellkultur, which has been shown to secrete GH and GHS-R is secreted, can be measured in vitro in radioimmunoassays by adding anti-GH antibody to the cells.

Using an antibody against another hormone in place of the anti-GH antibody in radioimmunoassays, the amount of the secreted hormone can also be measured. Further, the GH secretion-inducing activity in vivo by injecting the peptide having the Ca-releasing activity into a peripheral vein of a creature and in measuring the concentration of GH can be confirmed in the serum.

Zum Analysieren der Struktur des gereinigten Peptids kann ein bekanntes Verfahren verwendet werden. For analyzing the structure of the purified peptide, a known method can be used.

Zur Bestimmung der Aminosäuresequenz des Peptids gibt es ein Verfahren, bei dem Aminosäurereste nacheinander von dem Carboxylende durch Edman-Abbau freigesetzt werden, gefolgt von der Identifikation der freigesetzten Aminosäuren durch Hochleistungsflüssigchromatographie HPLC sowie eine automatisierte Version davon durch einen Aminosäuresequenzer.

To determine the amino acid sequence of the peptide there is a method which releases the amino acid residues sequentially from the carboxyl terminus by Edman degradation, followed by identification of the released amino acids by high performance liquid chromatography HPLC , as well as an automated version thereof by an amino acid sequencer.

There is also a method for determining the amino acid sequence by measuring the molecular weights of ionized fragments thereof by GC-MASS. In the peptide containing modified amino acids in one aspect of the present invention, the modified amino acid as "unknown amino acid" upon determination of the amino acid sequence is identified.

In diesem Fall wird das modifizierte Peptid zu Aminosäureeinheiten zersetzt, aus denen die modifizierte Aminosäure getrennt und gereinigt wird, und die Struktur der modifizierten Aminosäure wird in einer üblichen Weise zum Bestimmen der Struktur der Verbindung bestimmt, wobei die gesamte Struktur des Peptids bekannt sein kann.

In this case, the modified peptide is decomposed into amino acid units from which the modified amino acid is separated and purified, and the structure of the modified amino acid is determined in a usual manner for determining the structure of the compound, wherein the entire structure of the peptide can be known. Alternativ gibt es ein Verfahren, bei dem das Peptid aus einer cDNA, die das modifizierte Peptid kodiert, erhalten wird, dann ein Peptid mit der Aminosäuresequenz des resultierenden Peptids chemisch synthetisiert wird, und das Molekulargewicht und die physikalischen Eigenschaften des synthetischen unmodifizierten Peptids mit denen des modifizierten Peptids verglichen werden, um die Struktur der modifizierten Gruppe zu bestimmen.

Alternatively, there is a method wherein the peptide is obtained from a cDNA coding the modified peptide, then a peptide having the amino acid sequence of the resulting peptide is chemically synthesized, and the molecular weight and physical properties of the synthetic unmodified peptide to those of the modified peptide are compared in order to determine the structure of the modified group.

Eine Teilaminosäuresequenz Kernsequenz , die in dem so strukturell bestimmten Peptid für die Ca-freisetzende Aktivität wesentlich ist, wird durch Messen der Ca-freisetzenden Aktivität von jedem Peptidfragment, das durch Spalten des Peptids mit einer Protease gebildet wird, offenbart.

A partial amino acid sequence core sequence which is substantially in the thus structurally determined peptide for the Ca-releasing activity is determined by measuring the Ca-releasing activity of each peptide fragment formed by cleaving said peptide with a protease, is disclosed. Die verwendete Protease sollte eine Protease sein, die für die Aminosäuresequenz des zu spaltenden Peptids hochspezifisch ist, aber eine geringspezifische Protease kann ebenso unter Bedingungen für die partielle Verdauung verwendet werden, um verschiedene Peptidfragmente aus dem Peptid zu erzeugen.

The protease used should be a protease which is highly specific for the amino acid sequence of the peptide to be cleaved, but a low specific protease can also be used under conditions for partial digestion to produce various peptide fragments from said peptide. Durch Messen der Ca-freisetzenden Aktivität von jedem so hergestellten Peptidfragment kann eine Kernsequenz, die für die Ca-freisetzende Aktivität wichtig ist, bekannt werden.

By measuring the Ca-releasing activity of each peptide fragment thus prepared, a core sequence essential for the Ca-releasing activity, are known. In dem endogenen GH-Sekretion-induzierenden Peptid wurde das dritte Serin am Aminoende mit einer Fettsäure acyliert, und es ist ebenso möglich, ein Peptidfragment mit einem Teil der Aminosäuresequenz des endogenen GH-Sekretion-induzierenden Peptids sowie ein Fettsäure-modifiziertes Peptid, umfassend eine Fettsäure, die durch eine Esterbindung an die Serinseitenkette in dem Peptidfragment gebunden ist, chemisch zu synthetisieren.

In the endogenous GH secretion-inducing peptide, the third serine was acylated at the amino end with a fatty acid, and it is also possible to use a peptide fragment having a part of the amino acid sequence of the endogenous GH secretion-inducing peptide, as well as a fatty acid-modified peptide comprising a fatty acid which is bound by an Esterbindung to the serine side chain in said peptide fragment chemically synthesized. Unter Verwendung des Peptidfragments kann das endogene GH-Sekretion-induzierende Peptid ausführlich analysiert werden.

Using the peptide fragment, the endogenous GH secretion-inducing peptide can be analyzed in detail. Gleichzeitig kann der Typ von Fettsäure, der für die Ca-freisetzende Aktivität notwendig ist, durch Vergleichen der Peptidfragmente, die mit verschiedenen Fettsäuren modifiziert sind, bestimmt werden. At the same time, the type of fatty acid that is essential for the Ca-releasing activity can be determined by comparing the peptide fragments modified with various fatty acids.

Beispielsweise ist in dem endogenen GH-Sekretion-induzierenden Peptid, abgeleitet von einigen Spezies von Xenopus Laevis, ein Aminosäurerest an der dritten Stelle am Aminoende nicht Serin, sondern Threonin, und dieses Threonin wurde mit einer Fettsäure acyliert, und diese peptidartige Verbindung kann ebenso synthetisiert werden, und die Verbindung kann ausführlich analysiert werden.

For example, in the endogenous GH secretion-inducing peptide derived from some species of Xenopus Laevis, an amino acid residue at the third position at the amino terminus is not serine but threonine, and this threonine has been acylated with a fatty acid, and this peptide-type compound can also be synthesized are, and the compound can be analyzed in detail.

Durch Vergleichen der Aminosäuresequenzen von diesen Peptiden mit einer GH-Sekretion-induzierenden Aktivität bei Wirbeltieren kann eine Region, die weitgehend in Wirbeltieren konserviert ist, gefunden werden, und aus der Aminosäuresequenz der Region kann eine Kernsequenz, die für die GH-Sekretion-induzierende Aktivität wichtig ist, gefunden werden.

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